超濾(lv)離心(xin)管是(shi)實驗中用到的器皿(min)，使用過程中經常會遇(yu)到一(yi)些問題，上海登(deng)寧(ning)總結(jie)了以(yi)下常遇(yu)到的問題及(ji)其(qi)解決方法(fa)，我們一(yi)起去看下吧！
離心(xin)(xin)管是(shi)一(yi)個(ge)(ge)(ge)簡單(dan)的(de)(de)(de)可以承受高轉速壓力的(de)(de)(de)管子(zi),比(bi)如(ru)離一(yi)些(xie)樣品,分(fen)(fen)離出上清(qing)沉(chen)淀。超(chao)濾(lv)離心(xin)(xin)管會有一(yi)個(ge)(ge)(ge)類(lei)似(si)于內管和(he)外管的(de)(de)(de)兩(liang)個(ge)(ge)(ge)部分(fen)(fen),內管中(zhong)是(shi)帶有一(yi)定分(fen)(fen)子(zi)量(liang)的(de)(de)(de)膜,當高速離心(xin)(xin)時,分(fen)(fen)子(zi)量(liang)比(bi)它(ta)(ta)小的(de)(de)(de)就漏到(dao)下(xia)面的(de)(de)(de)管子(zi)（即外管）中(zhong)了,分(fen)(fen)子(zi)量(liang)比(bi)它(ta)(ta)大的(de)(de)(de)就截留(liu)在上面（即內管中(zhong)）,就是(shi)超(chao)濾(lv)的(de)(de)(de)原理.常用于濃縮樣品。
超濾離心管的分子量(liang)選擇：
按照樣品(pin)量和目標(biao)分(fen)(fen)子(zi)(zi)(zi)量選(xuan)(xuan)擇適當的(de)(de)(de)(de)超(chao)濾離(li)(li)心管(guan)，為了得到zui高(gao)的(de)(de)(de)(de)收率，所選(xuan)(xuan)濾膜(mo)(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)截(jie)(jie)留(liu)(liu)分(fen)(fen)子(zi)(zi)(zi)量MWCO建議選(xuan)(xuan)擇所需(xu)截(jie)(jie)留(liu)(liu)分(fen)(fen)子(zi)(zi)(zi)大小(xiao)(xiao)的(de)(de)(de)(de)1/3左右，不(bu)超(chao)過(guo)目標(biao)分(fen)(fen)子(zi)(zi)(zi)量的(de)(de)(de)(de)一半。因為超(chao)濾膜(mo)(mo)(mo)上(shang)孔徑是平均孔徑，膜(mo)(mo)(mo)上(shang)的(de)(de)(de)(de)孔并非(fei)均勻，離(li)(li)心高(gao)壓(ya)下也可(ke)(ke)能滲漏，因此(ci)截(jie)(jie)留(liu)(liu)孔徑越(yue)小(xiao)(xiao)，流速越(yue)慢(man)但截(jie)(jie)留(liu)(liu)比例更大。如(ru)果樣本濃度(du)低體積(ji)(ji)(ji)大，可(ke)(ke)選(xuan)(xuan)擇較小(xiao)(xiao)容積(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)超(chao)濾管(guan)多次(ci)重復加樣離(li)(li)心。如(ru)果同時(shi)需(xu)要脫(tuo)鹽和去(qu)除可(ke)(ke)溶小(xiao)(xiao)分(fen)(fen)子(zi)(zi)(zi)雜質，可(ke)(ke)將待濃縮樣品(pin)稀(xi)釋到超(chao)濾管(guan)zui大容積(ji)(ji)(ji)再離(li)(li)心，重復2次(ci)可(ke)(ke)除去(qu)99%鹽。避(bi)免(mian)過(guo)長時(shi)間或者過(guo)速離(li)(li)心，雖然高(gao)品(pin)質的(de)(de)(de)(de)產(chan)品(pin)都(dou)有防死端設計(ji)，可(ke)(ke)避(bi)免(mian)過(guo)度(du)離(li)(li)心造(zao)成(cheng)膜(mo)(mo)(mo)表(biao)(biao)面(mian)(mian)干(gan)而(er)造(zao)成(cheng)不(bu)可(ke)(ke)逆吸(xi)(xi)附(fu)。避(bi)免(mian)過(guo)度(du)濃縮，zui終體積(ji)(ji)(ji)越(yue)小(xiao)(xiao)，越(yue)容易因表(biao)(biao)面(mian)(mian)吸(xi)(xi)附(fu)而(er)損失得率。離(li)(li)心后用Tips輕輕吹(chui)吸(xi)(xi)幾次(ci)濾膜(mo)(mo)(mo)截(jie)(jie)留(liu)(liu)的(de)(de)(de)(de)溶液，必(bi)要時(shi)補加一定體積(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)緩沖液沖洗(xi)膜(mo)(mo)(mo)表(biao)(biao)面(mian)(mian)，有助于減少(shao)膜(mo)(mo)(mo)表(biao)(biao)面(mian)(mian)吸(xi)(xi)附(fu)，能提(ti)高(gao)回收率。盡量避(bi)免(mian)Tips接觸膜(mo)(mo)(mo)表(biao)(biao)面(mian)(mian)。
超(chao)濾離心管(guan)是否(fou)要(yao)預處(chu)理(li)：
超(chao)濾(lv)離心(xin)管通常不(bu)需(xu)要(yao)預(yu)(yu)處(chu)理即可使用(yong)，不(bu)過對(dui)于蛋(dan)白質樣本處(chu)理，特(te)別(bie)是(shi)較稀的(de)(de)蛋(dan)白質溶液來說(<10ug/mL),用(yong)超(chao)濾(lv)膜濃縮回(hui)收率常常是(shi)不(bu)定量(liang)的(de)(de)。雖(sui)然PES材料使非特(te)異吸附zui小(xiao)化，但是(shi),某些蛋(dan)白,特(te)別(bie)是(shi)稀的(de)(de)時(shi)候,會有問題。非特(te)異結(jie)合的(de)(de)程(cheng)度隨著個(ge)別(bie)蛋(dan)白結(jie)構的(de)(de)不(bu)同而不(bu)同。含有帶電的(de)(de)或(huo)者疏水結(jie)構域的(de)(de)蛋(dan)白質更易于不(bu)可逆(ni)結(jie)合到不(bu)同表面(mian)。對(dui)超(chao)濾(lv)離心(xin)管表面(mian)做(zuo)鈍(dun)化預(yu)(yu)處(chu)理可降低蛋(dan)白質在膜表面(mian)的(de)(de)吸附性損(sun)失，大多數情況(kuang)下，在濃縮稀蛋(dan)白溶液之前預(yu)(yu)處(chu)理柱子(zi)可以(yi)提高回(hui)收率，因為溶液可填(tian)滿膜和表面(mian)暴(bao)露的(de)(de)空白蛋(dan)白吸附位點。鈍(dun)化的(de)(de)方法(fa)是(shi)預(yu)(yu)先用(yong)zui高容積的(de)(de)鈍(dun)化溶液預(yu)(yu)浸(jin)泡柱子(zi)1小(xiao)時(shi)以(yi)上，蒸(zheng)餾水沖洗柱子(zi)，再用(yong)蒸(zheng)餾水離心(xin)一次除(chu)去可(ke)能殘(can)留在(zai)膜(mo)上的(de)鈍化溶(rong)液。注意鈍化處理(li)后別讓膜(mo)干了。如(ru)果(guo)要(yao)留待以后使用，需要(yao)加(jia)無菌蒸餾水保持膜(mo)濕(shi)潤。
常用的鈍化溶(rong)液可選擇：
1、1％牛血(xue)清白蛋白磷酸緩沖(chong)液溶液
2、5％十二(er)烷基磺酸鈉蒸餾水(shui)(shui)水(shui)(shui)溶(rong)液(ye)
3、5％Tween-20非離子(zi)活性劑蒸(zheng)餾水溶液
4、5％Triton-X 蒸餾水溶液
5、5％聚乙二(er)醇化合物蒸餾水溶(rong)液
6、1％免(mian)疫球蛋白IgG磷酸緩沖液溶液
超濾離心管因為需要(yao)高速(su)離心，某(mou)些對剪切(qie)力或壓力誘導(dao)下易變(bian)性的不(bu)穩定樣品(pin)可(ke)能不(bu)太適合。另外(wai)超濾膜上(shang)孔徑是平均孔徑，膜容易堵，對于(yu)有(you)微小(xiao)顆(ke)粒或者(zhe)碎片的樣品(pin)，先(xian)用較(jiao)大孔徑的(de)超濾(lv)管(guan)過濾(lv)一次，再(zai)進行下(xia)一步濃縮。
超(chao)濾離心管(guan)是否可以重復使(shi)用：
離(li)(li)心超濾管(guan)通常不(bu)能消(xiao)毒再(zai)(zai)次性使用。由于(yu)單管(guan)價格并不(bu)便宜，不(bu)少人(ren)嘗試重復(fu)使用----經驗(yan)是(shi)用蒸(zheng)餾水(shui)清(qing)洗膜表面多(duo)次，離(li)(li)心一次到兩次，那種可(ke)以反向離(li)(li)心的(de)小(xiao)管(guan)子可(ke)以加蒸(zheng)餾水(shui)浸泡后反向多(duo)離(li)(li)心一次，會(hui)(hui)好些(xie)。可(ke)重復(fu)用于(yu)同(tong)一樣(yang)品(pin)，不(bu)用時可(ke)用蒸(zheng)餾水(shui)浸泡，但是(shi)要防(fang)(fang)止(zhi)細菌污染。不(bu)同(tong)樣(yang)品(pin)就不(bu)要混用了(le)。有人(ren)說泡在(zai)20%酒精、1N的(de)NaOH（氫氧化鈉）中，防(fang)(fang)止(zhi)長(chang)菌，而且防(fang)(fang)干(gan)，只要超濾膜侵了(le)水(shui)，就不(bu)可(ke)以再(zai)(zai)讓(rang)它干(gan)，但也有人(ren)說會(hui)(hui)破(po)壞膜結構。反正廠家一般不(bu)支(zhi)持(chi)重復(fu)用。多(duo)次重復(fu)使用會(hui)(hui)堵塞濾膜上的(de)孔(kong)徑，甚至出現漏液現象，影響實驗(yan)結果。
上(shang)海登寧科技有限公司是國內(nei)專業的實驗(yan)過濾材(cai)料提供(gong)商，致(zhi)力于將質(zhi)量、可靠性和操作性突出的產(chan)品(pin)帶給每一(yi)位客戶。公司產(chan)品(pin)包括各(ge)類濾紙、濾膜、濾器以(yi)及輔助器材(cai)，普遍應(ying)用(yong)于生命科學，農業，藥物醫(yi)學，化(hua)工(gong)，食品(pin)，水質(zhi)分析，環境監測等各(ge)個領域，公司與各(ge)廠家建立了(le)穩定的(de)合作(zuo)關系，確保品質的(de)同時更可以滿(man)足客戶對(dui)于便(bian)捷和實惠的(de)需求。
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